总糖含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
英文名称：Total sugar content test kit
关键词：总糖含量检测|总糖含量测定|总糖含量|总糖
货号：BC2715
规格：100T/96S
产品内容：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存；
标准品：粉剂×1 支，10mg 无水葡萄糖，4℃保存；临用前加 1mL 蒸馏水溶解为 10mg/mL 的葡萄糖标准品备用。

产品说明：
糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与 DNS 试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈桔红色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样品中的总糖含量。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

操作步骤：
一、样品中总糖的提取：
组织：称取约 0.1g 样品，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，沸水浴 30min，加入 1mL
试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）
血清（浆）、液体体积：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.1mL 试剂一，0.15mL 蒸馏水，匀浆，沸水浴 30min，加入 0.1mL 试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 1mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）
二、测定操作表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1.5、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1mg/mL。
3、加样表：
试剂（µL） 空白管 测定管 标准管
蒸馏水       30
样本                30
标准品                     30
试剂三       30     30     30
混匀，沸水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水       180    180    180
混匀，取出 200µL 在 540nm 下测定吸光值，并计算∆A 测=A 测定管-A 空白管、∆A 标=A 标准管-A 空白管。
三、总糖含量计算：
1、标准曲线的绘制：
以标准管的浓度为x轴，对应的∆A标为y轴绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将∆A测带入方程中计算得x（mg/mL）。
2、按样本鲜重计算：
总糖（mg/g 鲜重）=（x×V 样总）÷W×稀释倍数=10×x÷W×稀释倍数
3、按血清（浆）、液体体积计算：
总糖（mg/mL）=（x×V 提）÷V 样×稀释倍数=10×x×稀释倍数
V 样总：组织样本总体积，10mL；
W：样本鲜重，g；
V 提：血清或液体样本总体积，1mL；
V 样：血清或液体体积，0.1mL。

注意事项：
1、空白管只需做一管。
2、如果∆A 大于 1.2，需要将上清液用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
3、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。
注意：最低检测限为 5mg/g 鲜重。