内质网提取试剂盒

中文名称：内质网提取试剂盒
英文名称：Endoplasmic reticulum Extraction Kit
产品规格：50T|100T
产品组成：

储存条件：
保存液2-8℃保存，提取液-20℃保存。
【注】：
● 提取液长期不用时置于-20℃保存，15天内要多次使用的话置4℃保存即可。
● 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期：
1年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
注意事项：
1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验结果。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品简介：
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网的提取。
本试剂盒适用于各种粗面内质网和光面内质网的提取。
本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可用于下游内质网蛋白提取等实验。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：
● 离心机● 振荡器● Dounce匀浆器● 涡旋混匀器
● PBS ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可以。
● 要求离心力30000g～50000g的离心，最好能达到50000g左右。最小离心力需要保证30000g。

使用方法：

细胞内质网提取：
1、取1～2×107个细胞，在4℃，500×条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2、用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
【注】：
● 在500g条件下离心5分钟。
3、加入500μl～1ml冷的试剂A，置冰上10分钟。
4、用Dounce匀浆器匀浆30～40下。
5、将匀浆液在4℃，1000g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
6、将上清在4℃，11000g离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7、将上清在4℃，30000g～50000g离心45分钟，弃上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果条件允许，将离心力加大到100000g，有利于提高光面内质网小泡回收率。
● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
8、在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
9、在4℃，30000g～50000g离心45分钟。
【注】：
● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
10、弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
【注】：
● 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬，根据实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。
11、即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。


组织内质网提取：
1、取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2、用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
【注】：
● 在500g条件下离心5分钟
3、加入500μl～1ml冷的试剂A，置冰上10分钟。
4、用Dounce匀浆器匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后4℃，1000g离心5分钟。
5、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6、在4℃，11000g离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7、将上清在4℃，30000g～50000g离心45分钟，弃上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果条件允许，将离心力加大到100000g，有利于提高光面内质网小泡回收率。
● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
8、在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
9、在4℃，30000g～50000g离心45分钟。
【注】：
● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
10、弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
● 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬，根据实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。
● 需要提取内质网蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。
11、即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！