免疫沉淀磁珠 ProteinA/G Immunoprecipitation Kit

货号：M2400/M2410

规格：20T/100T

保存：2-8℃

产品内容：

  免疫沉淀磁珠 ProteinA/G Immunoprecipitation Kit系列产品是利用纳米表面技术使Protein A/G 高密度定向包被到超顺磁性微球表面，与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比，该产品具有更多的抗体结合位点，磁珠使用量更少，非特异性结合率低，可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合Human IgG的能力可达到300 μg以上，单个沉淀反应仅需25 μL磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积，大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间，15 min内即可完成抗体吸附过程，30 min内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解，保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。

免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。

本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。操作者可以参考本操作说明书，附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与Protein A磁珠、Protein A/G的结合能力。

产品特性：

注：磁珠结合 Human IgG 能力（Antibody Capacity）分别为：Protein A：0.4~0.5 mg/mL; Protein A/G： 0.5~0.6 mg/mL

操作步骤：

1.抗原样品制备：本操作说明书提供以下四种样品处理方法，建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理，使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理：若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液（②）稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 10~100 µg/ mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 500 g, 10 min），弃上清后称重，按每毫克细胞50 µL的比例用1× PBS（③）洗涤2次；按每毫克细胞5~10 µL的比例加入结合缓冲液（②），同时加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为1 mM的PMSF），混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃,14000 g,10min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

贴壁细胞样品处理：移去培养基，按每 1.0×10⁵ 个细胞 150 µL 的比例用 1×PBS（③）洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mL EP管内，按每1.0×10⁵个细胞20~30 µL的比例加入结合缓冲液（②），同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的 PMSF)，混匀后置于冰上处理 10 min；离心收集上清液(4℃, 14000 g,10 min)，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

大肠杆菌样品处理：离心收集大肠杆菌(4℃, 12000 g, 2 min)，弃上清后称重，按每克(湿重)菌体10 mL 的比例用1×PBS（③）洗涤2次；按每克（湿重）菌体 5~10 mL 的比例加入结合缓冲液（②），同时加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1 mM 的 PMSF），重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清（4℃, 17000 g, 10min）。

2.磁珠预处理：将免疫沉淀磁珠（①）漩涡振荡1 min，使磁珠充分振荡重悬；取25~50µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中。加入200 µL结合缓冲液（②）洗涤，进行磁性分离［将EP管放置于磁性分离器上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；该操作描述以下省略］，弃上清液，从磁性分离器上取下EP管，重复洗涤一次。最后加入200 µL结合缓冲液（②）重悬磁珠以备用。

3.抗体结合反应：

抗体工作液的制备：用结合缓冲液（②）稀释抗体样品，配制成终浓度为5~50 µg/ mL抗体工作液，置于冰上备用。

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