很多同学都觉得构建细胞球体太不重要了 ,培养基也不重要,培养板也不重要 ,要么怎么可能有悬浮细胞呢? 悬浮细胞不就一养就悬浮了? 甚至有些细胞三天不加液不换液不就聚团了吗?
悬浮细胞成团主要有以下几个原因:
1.消化过程过于粗暴、吹打太用力、消化过久、消化液太强或有毒性等,会导致细胞死亡,细胞死亡后释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团。
2. 细胞离心速度过大或时间太长,也容易造成细胞抱团。
3. 消化不完全时,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度时,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难。
4. 状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况,比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差。
5. 传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。
6. 非震荡培养或细菌量过多的话就会成团
这种聚团并不是细胞球体,细胞球体主要是由细胞间粘附形成,使用生长培养物的物理或者化学性质促使细胞聚集在一起形成3D结构。可以由细胞株、原代细胞或组织的片段构建。
细胞球体:具有较为规则的球形结构,内部细胞和外部细胞的生长环境和状态可能存在差异,例如接近外表面的细胞灌注良好,代谢活跃,增殖快速,而球体的最内部细胞灌注相当差,代谢和增殖趋于停滞,在较大的细胞球内部甚至出现细胞坏死。
细胞球体:一般需要在非依赖型(anchorage-independent condition)的培养皿中培养,选用低吸附培养板加肿瘤干细胞成球培养基(启达生物,货号:P2401)培养。
细胞成球后使用共聚焦显微拍摄
细胞成团后使用共聚焦显微镜拍摄
两者的科研应用:
细胞成团:通常需要避免细胞成团,以保证细胞培养的正常进行。
细胞球体:广泛用于评估药物有效性和毒性的筛查试验,还可用于研究肿瘤行为、耐药性以及癌细胞与其微环境之间的相互作用,此外,以治疗为目的将球体向患者移植的研究也正在进行,且在缺血性疾病及肝病治疗方面,球体的有效性已获认可。
培养基:TSCM肿瘤干细胞成球培养基(启达生物,P2401)
1. 球体培养无需支架,通过贴壁细胞趋向于聚集的特性形成细胞球体
2. 大部分肿瘤细胞株可直接使用TSCM成球
3. 可培养复杂的球体和类器官
4 .可维持同质肿瘤球的传代和扩增
5 .无血清无直接动物源蛋白组分,可保持实验的统一性和可验证性。