Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒-分析方法-资讯-生物在线

Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒

作者:北京索莱宝科技有限公司 2019-09-05T00:00 (访问量:3743)

Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒 

品牌:Solarbio | 货号:P1320
商品货号:商品品牌:规格基本售价:选择规格
P1320-25TSolarbio25T300.00元
P1320-50TSolarbio50T450.00元
P1320-100TSolarbio100T800.00元
英文名称Tris-Tricine-SDS-PAGE
储存条件2-8℃,避光,有效期1年
单位

产品简介:常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白,对于相对分子量小的,尤其是10 kD 以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽,成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的凝胶,方便、快捷,电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。。

注意事项:
1、10%APS配制后分装-20 度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换,使用-20 度保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。

配胶说明: 根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度,凝胶浓度配方参考附表。



I 配制分离胶 
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。 
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。 
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1 mm mini-gel,分离胶溶液加约 4 ml ),然后在分离胶溶液上轻轻 覆盖一层 1-3 cm 的水层,使凝胶表面保持平整。 
4、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶 
去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水尽量吸去。 
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。 
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。 
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1 mm 的 mini-gel,夹层胶溶液加约 1 ml ), 然后在夹层 胶溶液上轻轻覆盖一层水层,使凝胶表面保持平整。 
4、静置,待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。 

III 配制浓缩胶 
去除覆盖在夹层胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。 
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。 
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。
 3、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。 
4、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。 
5、进行电泳操作。 

IV 电泳 将电泳槽放入 4℃或冰水浴中,外槽加入阳极缓冲液(T1225),内槽加入阴极缓冲液(T1215),30V 预电泳 10min, 将样品(已经过 Tricine 专用上样缓冲液 P1325 处理)加入点样孔后 30V 电泳 1 小时,100V 电泳至溴酚蓝到达胶底 部后停止电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。 

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T1225                 1×Tris-tricine-SDS-PAGE 电泳缓冲液(阳极+) 
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