<p style="color: #3e3e3e;"><strong>纯化工艺表征</strong></p> <p style="color: #3e3e3e;">纯化工艺表征（Process Characterization）是通过生产工艺的系统性研究，为工艺表现和产品质量属性提供数据支持。</p> <p style="color: #3e3e3e;">其研究目标是为了确认关键工艺参数（CPP，Critical Process Parameters），定义这些参数的操作范围，在可操作接受的范围内设置推荐的操作范围，以保证工艺的重现性和稳定性。</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p style="color: #3e3e3e;">工艺表征大致流程如下图：<img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/929/4410951776513210181.png" width="554" height="254" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">在具体执行中，以单步层析的关键工艺参数DOE实验为例，需要对风险评估出来的关键参数进行测试实验，通常采用实验设计软件给出实验设计。</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p style="color: #3e3e3e;">下图为层析参数鱼骨图：</p> <p style="color: #3e3e3e;"><img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/989/8638981966513210181.png" alt="图片" width="554" height="375" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">以<span class="wx_search_keyword_wrap">离子交换层析</span>为例，假设通过评估筛选出CPP 4项，分别为样品及结合ph、流速/保留时间、平衡液盐浓度及洗脱液盐浓度，每个因素设置2个水平，响应参数为纯度，实验设计如下图所示：</p> <p style="color: #3e3e3e;"><strong>（注：以下参数为方便展示随意设置，并非真实测试数据）</strong></p> <p style="color: #3e3e3e;">1.因子及因子水平</p> <table style="color: #3e3e3e;" width="100%" cellspacing="0" cellpadding="7"><colgroup><col width="169" /><col width="170" /><col width="170" /></colgroup> <tbody> <tr valign="top"> <td bgcolor="#4472c4"> <p>因子</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>高水平</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>低水平</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>样品及结合ph</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>8</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>5</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td> <p>保留时间min</p> </td> <td> <p>8</p> </td> <td> <p>2</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>平衡液盐浓度mM</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>200</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>20</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td> <p>洗脱液盐浓度mM</p> </td> <td> <p>800</p> </td> <td> <p>400</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="color: #3e3e3e;">2.响应参数、标准及检测方法</p> <table style="color: #3e3e3e;" width="100%" cellspacing="0" cellpadding="7"><colgroup><col width="169" /><col width="170" /><col width="170" /></colgroup> <tbody> <tr valign="top"> <td bgcolor="#4472c4"> <p>响应</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>标准</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>检测方法</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>纯度</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>95%</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p><span class="wx_search_keyword_wrap">HPLC</span></p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="color: #3e3e3e;">3.实验设计（全析因实验）</p> <table style="color: #3e3e3e;" width="100%" cellspacing="0" cellpadding="7"><colgroup><col width="82" /><col width="83" /><col width="83" /><col width="74" /><col width="74" /><col width="73" /></colgroup> <tbody> <tr valign="top"> <td bgcolor="#4472c4"> <p>因子</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>实验次数</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>区组</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>基本设计</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>仿行</p> </td> <td bgcolor="#4472c4"> <p>中心点</p> </td> </tr> <tr valign="top"> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>4</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>19</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>1</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>4,16</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>1</p> </td> <td bgcolor="#d9e2f3"> <p>3</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="color: #3e3e3e;"><img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/847/2994658859513210181.png" alt="图片" width="554" height="372" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">对于每一组层析实验，其流程包括柱料及缓冲准备、系统清洗、上样、平衡、洗脱、再生等环节，步骤冗长，费时耗力，通常完成一个相当样品量的层析测试可能需要4-6h</p> <p style="color: #3e3e3e;">对于一些纯化平台规模不大的单位，比如仅有2台小试纯化系统，完成全部组的实验测试最低需要38h,效率低下，另外通常会导致人员加班或者隔日测试，如果采取隔日测试的方案，样品存放时间过久可能导致理化性质的变化，尤其是对于分子设计不稳定的项目，进一步导致结果异常。</p> <p style="color: #3e3e3e;">所以又快又好的、能在一个工作日完成所有实验组测试的高效率的<span class="wx_search_keyword_wrap">层析系统</span>的需求日益高涨。</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p><strong style="color: #3e3e3e;">0<span title="">2&nbsp;&nbsp;</span></strong><strong style="color: #3e3e3e;">在线配液连续层析技术</strong></p> <p style="color: #3e3e3e;"><img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/574/2720590086513210181.png" alt="图片" width="554" height="363" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p><strong style="color: #3e3e3e;">在线配液连续层析系统的特点如下：</strong></p> <p style="color: #3e3e3e;">1）无需手动配置工作缓冲液，无需手动摸索配方，只需贮备母液，缓冲液成本节省约40%；</p> <p style="color: #3e3e3e;">2）可实现7&times;24h连续层析或生产，大幅提升层析效率，产率提高40-50%；</p> <p style="color: #3e3e3e;">3）灵活适配反复使用或一次性管路，一次性管路无需清洁验证；</p> <p style="color: #3e3e3e;">4）填料成本节省约30%；</p> <p style="color: #3e3e3e;">5）人工成本节省约50%；</p> <p style="color: #3e3e3e;">其中在线配液功能可选配，层析规模覆盖小试、中试、生产，流速范围0-3600L/h。连续层析技术可大幅节省层析时间成本，快速完成大量工艺开发及层析生产任务。</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p style="color: #3e3e3e;">在线配液连续层析技术通常的层析窜连逻辑如下：</p> <p style="color: #3e3e3e;"><img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/999/2707859908513210181.png" alt="图片" width="554" height="499" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">*上样-串联方式，1柱流穿的蛋白被2柱捕获，3层析柱进行洗脱再生等步骤；</p> <p style="color: #3e3e3e;">*冲洗-1柱达到设定的穿透点后，将未吸附的蛋白冲洗到3柱；2柱承接上样</p> <p style="color: #3e3e3e;">*洗脱-1,3柱完成冲洗后，1柱单独进入洗脱，3柱承接2柱穿透；</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p style="color: #3e3e3e;">2柱满载后窜连1柱进入冲洗流程，3柱承接上样；冲洗完毕后2柱单独进入洗脱，窜连3,1柱进入上样；3柱满载后窜连2柱进入冲洗流程，1柱承接上样，循环往复，流速不变，任何一个时间点均有1个层析柱在进行上样，实现连续层析。</p> <p style="color: #3e3e3e;">在线配液连续层析系统的软件界面如下：</p> <p style="color: #3e3e3e;"><img class="rich_pages wxw-img" src="https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0708/051/8824615078513210181.png" alt="图片" width="554" height="289" border="0" /></p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p style="color: #3e3e3e;">内置4个系统泵分别配置酸、碱、盐、水，每个泵链接3个入口。1个样品泵同样配置3个入口。工作缓冲液通过检测器<span class="wx_search_keyword_wrap">反馈调节</span>，达标后流入系统，3根层析柱均适配紫外、电导、温度、ph、压力等检测器，每根层析柱对应3组分出口。界面简洁实用。</p> <p style="color: #3e3e3e;">&nbsp;</p> <p><strong style="color: #3e3e3e;">0<span title="">3&nbsp;</span></strong><strong style="color: #3e3e3e;">在线配液连续层析技术解决方案</strong></p> <p style="color: #3e3e3e;"><strong>广州市艾贝泰生物科技有限公司是Sepragen径向层析系统中国代理，欢迎咨询相关产品。</strong></p>